Mass spectrometric study of the <i>Escherichia coli</i> repressor proteins, IcIR and GcIR, and their complexes with DNA
Notice bibliographique
Résumé
In Escherichia coli, the IclR protein regulates both the aceBAK operon and its own synthesis. Database homology searches have identified many IclR-like proteins, now known as the IclR family, which can be identified by a conserved C-terminal region. We have cloned and purified one of these proteins, which we have named GclR (glyoxylate carboligase repressor). Although purification is straightforward, both the IclR and GclR proteins are difficult to manipulate, requiring high salt (up to 0.6 M KCl) for solubility. With the advent of nanospray ionization, we could transfer the proteins into much higher concentrations of volatile buffer than had been practical with ordinary electrospray. In 0.5 M ammonium bicarbonate buffer, both proteins were stable as tetramers, with a small amount of dimer. In a separate experiment, we found that IclR protein selected from a random pool a sequence which matched exactly that of the presumed binding region of the GclR protein, although IclR does not regulate the gcl gene. We designed a 29 bp synthetic DNA to which IclR and GclR bind, and with which we were able to form noncovalent DNA-protein complexes for further mass spectrometry analysis. These complexes were far more stable than the proteins alone, and we have evidence of a stoichiometry which has not been described previously with (protein monomer : dsDNA) = (4 : 1).
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».