Determination of apparent calcium affinity for endogenously expressed human sarco(endo)plasmic reticulum calcium-ATPase isoform SERCA3
Notice bibliographique
Résumé
The sarco(endo)plasmic reticulum Ca(2+)-ATPases (SERCAs) play a crucial role in regulating free cytosolic Ca(2+) concentration in diverse cell types. It has been shown that recombinant SERCA3, when measured in heterologous systems, exhibits low apparent affinity for Ca(2+); however, Ca(2+) affinity of native SERCA3 in an endogenous setting has not been examined. Such a measurement is complicated, because SERCA3 is always coexpressed with the housekeeping isoform SERCA2b. We used a fluorescence-based assay for monitoring continuous Ca(2+) uptake into microsomes to examine the properties of endogenous human SERCA3 and SERCA2b. The kinetic parameters were derived using a cooperative two-component uptake model for Ca(2+) activation, and the values assigned to SERCA3 were confirmed using the highly specific human SERCA3 inhibitory antibody PL/IM430. First, using recombinant human SERCA3 and SERCA2b proteins transiently expressed in HEK-293 cells, we confirmed the previously observed low apparent Ca(2+) affinity for SERCA3 compared with SERCA2b (1.10 +/- 0.04 vs. 0.26 +/- 0.01 microM), and using mixtures of recombinant protein isoforms, we validated the two-component uptake model. Then we determined apparent Ca(2+) affinity for SERCA proteins present endogenously in cultured Jurkat T lymphocytes and freshly isolated human tonsil lymphocytes. The apparent Ca(2+) affinity in these two preparations was 1.04 +/- 0.07 and 1.1 +/- 0.2 muM for SERCA3 and 0.27 +/- 0.02 and 0.26 +/- 0.01 microM for SERCA2b, respectively. Our data demonstrate, for the first time, that affinity for Ca(2+) is inherently lower for SERCA3 expressed in situ than for other SERCA isoforms.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».