Development of a microplate coagulation assay for Factor V in human plasma
Notice bibliographique
Résumé
BACKGROUND: Factor V (FV) in its activated form, FVa, is a critical regulator of thrombin generation during fibrin clot formation. There is a need of a simple, fast, and inexpensive microplate-based coagulation assay to measure the functional activity of FV in human plasma. The objective of this study was to develop a microplate-based assay that measures FV coagulation activity during clot formation in human plasma, which is currently not available. METHODS: The FV assay requires a kinetic microplate reader to measure the change in absorbance at 405nm during fibrin formation in human plasma. The FV assay accurately measures the time, initial rate, and extent of fibrin clot formation in human plasma. RESULTS: The FV microplate assay is simple, fast, economical, sensitive to approx 24-80pM, and multiple samples may be analyzed simultaneously. All the required materials are commercially available. Standard curves of time or initial rate of fibrin clot formation vs FV activity in the 1-stage assay (Without activation by thrombin) may be used to measure FV activity in samples of human plasma. The assay was used to demonstrate that in nine patients with disseminated intravascular coagulation (DIC), the FV 1-stage, 2-stage (With activation by thrombin), and total (2-stage activity - 1-stage activity) activities were decreased, on average, by approximately 54%, 44%, and 42%, respectively, from prolonged clot times when compared to normal pooled human reference plasma (NHP). The results indicate that the FV in the DIC patient plasmas supported both a delayed and slower rate of fibrin clot formation compared with NHP; however, the extent of fibrin clot formation in the DIC patients remained largely unchanged from that observed with NHP. CONCLUSIONS: The FV microplate assay may be easily adapted to measure the activity of any coagulation factor using the appropriate factor-deficient plasma and clot initiating reagent. The microplate assay will find use in both research and clinical laboratories to provide measurement of the functional coagulation activity of FV in human plasma.
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Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
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score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».