Identification and Selected Reaction Monitoring (SRM) Quantification of Endocytosis Factors Associated with Numb
Notice bibliographique
Résumé
Numb is an endocytic adaptor protein that regulates the endocytosis and trafficking of transmembrane receptors including Notch, E-cadherin, and integrins. Vertebrate Numb is alternatively spliced at exons 3 and 9 to give rise to four protein isoforms. Expression of these isoforms varies at different developmental stages, and although the function of Numb isoforms containing exon 3 has been studied, the role of exon 9 inclusion has not been shown. Here we use affinity purification and tandem mass spectrometry to identify Numb associated proteins, including novel interactions with REPS1, BMP2K, and BCR. In vitro binding measurements indicated exon 9-independent Numb interaction with REPS1 and Eps15 EH domains. Selected reaction monitoring mass spectrometry was used to quantitatively compare the proteins associated with the p72 and p66 Numb isoforms, which differ by the exon 9 region. This showed that significantly more EPS15 and three AP-2 subunit proteins bound Numb isoforms containing exon 9. The EPS15 preference for exon 9-containing Numb was confirmed in intact cells by using a proximity ligation assay. Finally, we used multiplexed selected reaction monitoring mass spectrometry to assess the dynamic regulation of Numb association with endocytic proteins. Numb hyper-phosphorylation resulted in disassociation of Numb endocytic complexes, while inhibition of endocytosis did not alter Numb association with the AP-2 complex but altered recruitment of EPS15, REPS1, and BMP2K. Hence, quantitative mass spectrometric analysis of Numb protein-protein interactions has provided new insights into the assembly and regulation of protein complexes important in development and cancer.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».