High-Frequency Genetic Recombination and Reactivation of Orthopoxviruses from DNA Fragments Transfected into Leporipoxvirus-Infected Cells
Notice bibliographique
Résumé
Poxvirus DNA is not infectious because establishing an infection requires the activities of enzymes packaged in the virion. This barrier can be overcome by transfecting virus DNA into cells previously infected with another poxvirus, since the resident virus can provide the trans-acting systems needed to reactivate transfected DNA. In this study we show that cells infected with a leporipoxvirus, Shope fibroma virus (SFV), can reactivate vaccinia virus DNA. Similar heterologous packaging systems which used fowlpox-infected cells to reactivate vaccinia virus have been described, but SFV-infected cells promoted a far more efficient reaction that can produce virus titers exceeding 10(6) PFU/ micro g of transfected DNA. SFV-promoted reactions also exploit the hyperrecombinogenic systems previously characterized in SFV-infected cells, and these coupled recombination and reactivation reactions could be used to delete nonessential regions of the vaccinia virus genome and to reconstruct vaccinia virus from overlapping DNA fragments. SFV-catalyzed recombination reactions need only two 18- to 20-bp homologies to target PCR amplicons to restriction enzyme-cut vaccinia virus vectors, and this reaction feature was used to rapidly clone and express a gene encoding fluorescent green protein without the need for plaque purification or selectable markers. The ability of SFV-infected cells to reactivate fragments of vaccinia virus was ultimately limited by the number of recombinational exchanges required and one cannot reconstruct vaccinia virus from multiple PCR fragments spanning essential portions of the genome. These observations suggest that recombination is an integral part of poxvirus reactivation reactions and provide a useful new technique for altering the structure of poxvirus genomes.
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Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».