Structural Basis for the Altered Activity of Gly794 Variants of <i>Escherichia coli</i> β-Galactosidase<sup>†</sup>
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Notice bibliographique
Résumé
The open-closed conformational switch in the active site of Escherichia coli beta-galactosidase was studied by X-ray crystallography and enzyme kinetics. Replacement of Gly794 by alanine causes the apoenzyme to adopt the closed rather than the open conformation. Binding of the competitive inhibitor isopropyl thio-beta-D-galactoside (IPTG) requires the mutant enzyme to adopt its less favored open conformation, weakening affinity relative to wild type. In contrast, transition-state inhibitors bind to the enzyme in the closed conformation, which is favored for the mutant, and display increased affinity relative to wild type. Changes in affinity suggest that the free energy difference between the closed and open forms is 1-2 kcal/mol. By favoring the closed conformation, the substitution moves the resting state of the enzyme along the reaction coordinate relative to the native enzyme and destabilizes the ground state relative to the first transition state. The result is that the rate constant for galactosylation is increased but degalactosylation is slower. The covalent intermediate may be better stabilized than the second transition state. The substitution also results in better binding of glucose to both the free and the galactosylated enzyme. However, transgalactosylation with glucose to produce allolactose (the inducer of the lac operon) is slower with the mutant than with the native enzyme. This suggests either that the glucose is misaligned for the reaction or that the galactosylated enzyme with glucose bound is stabilized relative to the transition state for transgalactosylation.
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Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
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score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découle