Dexamethasone enhances erythropoietic differentiation of embryonic stem cells
Notice bibliographique
Résumé
We have studied the in vitro differentiation of murine embryonic stem cells (ES) towards erythropoiesis and expression of genes during this process. It has been reported that dexamethasone directs ES cells towards erythrocytic differentiation but the mechanism of gene regulation induced by dexamethasone is not well understood. We hypothesized that dexamethasone induces upregulation of erythropoietic genes such as GATA-1, FLK-1, EPO-R, and directs ES cells towards erythropoietic differentiation. Murine ES cells (129 CCE) obtained from Dr. Nagy laboratory, Canada, were subjected to the in vitro primary hematopoietic differentiation media containing methylcellulose, IMDM, IL -3, IL-6, and SCF (stem cell factor) without LIF (leukemia inhibitory factor) to promote embryoid body (EB) formation. Total RNA was collected on day 3, 5, and 9 EBs for gene expression studies using RT-PCR. On day 9, EBs were subjected to secondary differentiation using three different cytokines and growth factors combination, (1) SCF, EPO, dexamethasone, IGF, (2) SCF, IL-3, IL-6, TPO, (3) SCF IL-3, IL-6, TPO, EPO. Total RNA from day12 of secondary differentiated ES cells was collected to study cytokines and growth factors dependent erythrocytic differentiation and gene regulation, using RT-PCR. Our results demonstrate upregulation of Gata-1, Flk-1, HoxB-4, Epo-R, and globin genes (α-globin, BH-1 globin, b-major globin, e-globin, and z-globin) in the 9 days old EBs, whereas RNA collected from 5 days old EBs showed expression of HoxB-4, e-globin, γ-globin, BH1-globin, and FLK-1. Three days old EBs showed only HoxB-4 and FLK-1 gene expression and lack of expression of globin genes, indicating that erythropoiesis-specific genes and hemoglobin switch activate later. Gene expression studies of RNA collected from secondary differentiated ES cells and media containing dexamethasone showed downregulation of GATA-3 and upregulation of GATA-1, Flk-1, and Epo-R in comparison to the two other cytokines and growth factors media combination. These results confirm our hypothesis that dexamethasome induces erythropoiesis by downregulating GATA −3 and upregulating erythropoietic genes such as GATA-1, Flk-1, and Epo-R. The morphological characteristics of cells after secondary differentiation showed enhanced production of erythrocytic precursors in dexamethasone containing media, which corresponded with molecular studies.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
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Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
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score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».