Identification of an FHL1protein complex containing ACTN1, ACTN4, and PDLIM1 using affinity purifications and MS-based protein–protein interaction analysis
Notice bibliographique
Résumé
INTRODUCTION: Four and a half LIM domains protein 1 (FHL1) is the most widely expressed member of the FHL family of proteins, consisting of four and a half highly conserved LIM domains. A multifunctional and integral role for FHL1 has been implicated in muscle development, structural maintenance, and signaling. To date, 27 FHL1 mutations have been identified that result in at least six different X-linked myopathies, with patients often presenting with cardiovascular complications. Since proteins assemble into dynamic complexes within the cell, FHL1 likely mediates its biological functions in conjunction with other proteins. Delineation of FHL1 interactions could provide insight into its regulatory functions. METHODS: We performed tandem affinity purification from human embryonic kidney 293 (HEK-293) cells to purify FHL1 and interacting proteins. To identify the potential interactors of FHL1 we performed a total of 9 different purifications from HEK-293 cells which included 3 experimental replicates for each biological condition: FHL1, tag control (DPYSL3), and negative control (empty vector). Purified samples were analyzed by liquid chromatography mass spectrometry (LC-MS). Potential interactors were then verified by immunoprecipitation from mouse heart ventricles and interactions visualized in adult cardiomyocytes using 3D fluorescence microscopy. RESULTS: We identified a total of 310 different proteins from all 9 purifications and by applying stringent filtering criteria we eliminated all proteins found in any of the controls and only allowed those that were detected in two or more bait purification. We identified 34 high confidence potential binding partners of FHL1. We then showed that FHL1 exists as part of a complex that binds with PDLIM1, GSN and ACTN1.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».