MegaTevs: single-chain dual nucleases for efficient gene disruption
Notice bibliographique
Résumé
Targeting gene disruptions in complex genomes relies on imprecise repair by the non-homologous end-joining DNA pathway, creating mutagenic insertions or deletions (indels) at the break point. DNA end-processing enzymes are often co-expressed with genome-editing nucleases to enhance the frequency of indels, as the compatible cohesive ends generated by the nucleases can be precisely repaired, leading to a cycle of cleavage and non-mutagenic repair. Here, we present an alternative strategy to bias repair toward gene disruption by fusing two different nuclease active sites from I-TevI (a GIY-YIG enzyme) and I-OnuI E2 (an engineered meganuclease) into a single polypeptide chain. In vitro, the MegaTev enzyme generates two double-strand breaks to excise an intervening 30-bp fragment. In HEK 293 cells, we observe a high frequency of gene disruption without co-expression of DNA end-processing enzymes. Deep sequencing of disrupted target sites revealed minimal processing, consistent with the MegaTev sequestering the double-strand breaks from the DNA repair machinery. Off-target profiling revealed no detectable cleavage at sites where the I-TevI CNNNG cleavage motif is not appropriately spaced from the I-OnuI binding site. The MegaTev enzyme represents a small, programmable nuclease platform for extremely specific genome-engineering applications.
Récupéré en direct depuis OpenAlex et désinversé. Les résumés ne sont pas conservés dans cette base de données : les index inversés représentent 8,6 Go des 9,3 Go de texte de la base, et le serveur dispose de 13 Go libres.
Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».