Characterization of the dehydratase WcbK and the reductase WcaG involved in GDP-6-deoxy-<i>manno</i>-heptose biosynthesis in <i>Campylobacter jejuni</i>
Notice bibliographique
Résumé
The capsule of Campylobacter jejuni strain 81-176 comprises the unusual 6-deoxy-α-D-altro-heptose, whose biosynthesis and function are not known. In the present study, we characterized enzymes of the capsular cluster, WcbK and WcaG, to determine their role in 6-deoxy-altro-heptose synthesis. These enzymes are similar to the Yersinia pseudotuberculosis GDP-manno-heptose dehydratase/reductase DmhA/DmhB that we characterized previously. Capillary electrophoresis and MS analyses showed that WcbK is a GDP-manno-heptose dehydratase whose product can be reduced by WcaG, and that WcbK/WcaG can use the substrate GDP-mannose, although with lower efficiency than heptose. Comparison of kinetic parameters for WcbK and DmhA indicated that the relaxed substrate specificity of WcbK comes at the expense of catalytic performance on GDP-manno-heptose. Moreover, although WcbK/WcaG and DmhA/DmhB are involved in altro- versus manno-heptose synthesis respectively, the enzymes can be used interchangeably in mixed reactions. NMR spectroscopy analyses indicated conservation of the sugar manno configuration during catalysis by WcbK/WcaG. Therefore additional capsular enzymes may perform the C3 epimerization necessary to generate 6-deoxy-altro-heptose. Finally, a conserved residue (Thr(187) in WcbK) potentially involved in substrate specificity was identified by structural modelling of mannose and heptose dehydratases. Site-directed mutagenesis and kinetic analyses demonstrated its importance for enzymatic activity on heptose and mannose substrates.
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Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».