Cryoloading: introducing large molecules into live synaptosomes
Notice bibliographique
Résumé
Neurons communicate with their target cells primarily by the release of chemical transmitters from presynaptic nerve terminals. The study of CNS presynaptic nerve terminals, isolated as synaptosomes (SSMs) has, however, been hampered by the typical small size of these structures that precludes the introduction of non-membrane permeable test substances such as peptides and drugs. We have developed a method to introduce large alien compounds of at least 150 kDa into functional synaptosomes. Purified synaptosomes are frozen in cryo-preserving buffer containing the alien compound. Upon defrosting, many of the SSMs contain the alien compound presumably admitted by bulk buffer-transfer through the surface membranes that crack and reseal during the freeze/thaw cycle. ~80% of the cryoloaded synaptosomes were functional and recycled synaptic vesicles (SVs), as assessed by a standard styryl dye uptake assay. Access of the cryoloaded compound into the cytoplasm and biological activity were confirmed by block of depolarization-induced SV recycling with membrane-impermeant BAPTA (a rapid Ca(2+)-scavenger), or botulinum A light chain (which cleaves the soluble NSF attachment protein receptor (SNARE) protein SNAP25). A major advantage of the method is that loaded frozen synaptosomes can be stored virtually indefinitely for later experimentation. We also demonstrate that individual synaptosome types can be identified by immunostaining of receptors associated with its scab of attached postsynaptic membrane. Thus, cryoloading and scab-staining permits the examination of SV recycling in identified individual CNS presynaptic nerve terminals.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».