Development of a Tetracycline-Inducible Gene Expression System for the Study of Helicobacter pylori Pathogenesis
Notice bibliographique
Résumé
Deletion mutants and animal models have been instrumental in the study of Helicobacter pylori pathogenesis. Conditional mutants, however, would enable the study of the temporal gene requirement during H. pylori colonization and chronic infection. To achieve this goal, we adapted the Escherichia coli Tn10-derived tetracycline-inducible expression system for use in H. pylori. The ureA promoter was modified by inserting one or two tet operators to generate tetracycline-responsive promoters, named uPtetO, and these promoters were then fused to the reporter gfpmut2 and inserted into different loci. The expression of the tetracycline repressor (tetR) was placed under the control of one of three promoters and inserted into the chromosome. Conditional expression of green fluorescent protein (GFP) in strains harboring tetR and uPtetO-GFP was characterized by measuring GFP activity and by immunoblotting. The two tet-responsive uPtetO promoters differ in strength, and induction of these promoters was inducer concentration and time dependent, with maximum expression achieved after induction for 8 to 16 h. Furthermore, the chromosomal location of the uPtetO-GFP construct and the nature of the promoter driving expression of tetR influenced the strength of the uPtetO promoters upon induction. Integration of uPtetO-GFP and tetR constructs at different genomic loci was stable in vivo and did not affect colonization. Finally, we demonstrate tetracycline-dependent induction of GFP expression in vivo during chronic infection. These results open new experimental avenues for dissecting H. pylori pathogenesis using animal models and for testing the roles of specific genes in colonization of, adaptation to, and persistence in the host.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».