Mass spectrometric analysis and mutagenesis predict involvement of multiple cysteines in redox regulation of the skeletal muscle ryanodine receptor ion channel complex
Notice bibliographique
Résumé
The tetrameric skeletal muscle ryanodine receptor ion channel complex (RyR1) contains a large number of free cysteines that are potential targets for redox-active molecules. Here, we report the mass spectrometric analysis of free thiols in RyR1 using the lipophilic, thiol-specific probe monobromobimane (MBB). In the presence of reduced glutathione, MBB labeled 14 cysteines per RyR1 subunit in tryptic peptides in five of five experiments. Forty-six additional MBB-labeled cysteines per RyR1 subunit were detected with lower frequency in tryptic peptides, bringing the total number of MBB-labeled cysteines to 60 per RyR1 subunit. A combination of fluorescence detection and mass spectrometry of RyR1, labeled in the presence of reduced and oxidized glutathione, identified two redox-sensitive cysteines (C1040 and C1303). Regulation of RyR activity by reduced and oxidized glutathione was investigated in skeletal muscle mutant RyR1s in which 18 cysteines were substituted with serine or alanine, using a [(3)H]ryanodine ligand binding assay. Three single-site RyR1 mutants (C1781S, C2436S, and C2606S) and two multisite mutants with five and seven substituted cysteines exhibited a reduced redox response compared with wild-type RyR1. The results suggest that multiple cysteines determine the redox state and activity of RyR1.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».