Elaboration of a novel technique for purification of plasma membranes from <i>Xenopus laevis</i> oocytes
Notice bibliographique
Résumé
Over the past two decades, Xenopus laevis oocytes have been widely used as an expression system to investigate both physiological and pathological properties of membrane proteins such as channels and transporters. Past studies have clearly shown the key implications of mistargeting in relation to the pathogenesis of these proteins. To unambiguously determine the plasma membrane targeting of a protein, a thorough purification technique becomes essential. Unfortunately, available techniques are either too cumbersome, technically demanding, or require large amounts of material, all of which are not adequate when using oocytes individually injected with cRNA or DNA. In this article, we present a new technique that permits excellent purification of plasma membranes from X. laevis oocytes. This technique is fast, does not require particular skills such as peeling of vitelline membrane, and permits purification of multiple samples from as few as 10 and up to >100 oocytes. The procedure combines partial digestion of the vitelline membrane, polymerization of the plasma membrane, and low-speed centrifugations. We have validated this technique essentially with Western blot assays on three plasma membrane proteins [aquaporin (AQP)2, Na(+)-glucose cotransporter (SGLT)1, and transient receptor potential vanilloid (TRPV)5], using both wild-type and mistargeted forms of the proteins. Purified plasma membrane fractions were easily collected, and samples were found to be adequate for Western blot identification.
Récupéré en direct depuis OpenAlex et désinversé. Les résumés ne sont pas conservés dans cette base de données : les index inversés représentent 8,6 Go des 9,3 Go de texte de la base, et le serveur dispose de 13 Go libres.
Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,002 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».