Practical Labeling Methodology for Choline‐Derived Lipids and Applications in Live Cell Fluorescence Imaging
Notice bibliographique
Résumé
Lipids of the plasma membrane participate in a variety of biological processes, and methods to probe their function and cellular location are essential to understanding biochemical mechanisms. Previous reports have established that phosphocholine-containing lipids can be labeled by alkyne groups through metabolic incorporation. Herein, we have tested alkyne, azide and ketone-containing derivatives of choline as metabolic labels of choline-containing lipids in cells. We also show that 17-octadecynoic acid can be used as a complementary metabolic label for lipid acyl chains. We provide methods for the synthesis of cyanine-based dyes that are reactive with alkyne, azide and ketone metabolic labels. Using an improved method for fluorophore conjugation to azide or alkyne-modified lipids by Cu(I)-catalyzed azide-alkyne cycloaddition (CuAAC), we apply this methodology in cells. Lipid-labeled cell membranes were then interrogated using flow cytometry and fluorescence microscopy. Furthermore, we explored the utility of this labeling strategy for use in live cell experiments. We demonstrate measurements of lipid dynamics (lateral mobility) by fluorescence photobleaching recovery (FPR). In addition, we show that adhesion of cells to specific surfaces can be accomplished by chemically linking membrane lipids to a functionalized surface. The strategies described provide robust methods for introducing bioorthogonal labels into native lipids.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,001 | 0,001 |
| Communication savante | 0,000 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».