P2‐258: Live cell imaging reveals multiple mechanisms for rapid Amyloid Precursor Protein transport to the lysosome
Notice bibliographique
Résumé
Many lines of evidence suggest that the cleavage of the Amyloid Precursor Protein (APP) into beta-amyloid occurs after transport into the endosomal/ lysosomal system and that this transport may regulate beta-amyloid production. We have previously demonstrated gamma-secretase proteins and activity in the lysosome, along with unexpectedly rapid transport of APP to the lysosome, suggesting that the lysosome might be a site of amyloid production. Here we attempt to identify the regulatory proteins controlling this pathway. We used constructs encoding APP fused to a C-terminal fluorescent (or photoactivatable) protein tag and an N-terminal HA epitope tag. Compartments were identified using fluorescent-tagged marker proteins including LAMP (lysosome) and GalT (Golgi). In addition, cells were co-transfected with siRNAs or dominant-negative mutant forms or regulatory trafficking proteins. Transport from the cell surface of neuronal SN56 cells was followed by surface labeling these cells with fluorescently labeled anti-HA antibody. Transport from the Golgi to the lysosome is followed after first activating photactivatable GFP(paGFP)-tagged APP in the Golgi using 405 nm laser light. Live cell movies were then generated using Zeiss LSM510 Meta confocal microscope. We find that surface-labeled APP traffics rapidly to the lysosome from the cells surface by first forming large (1 micron) vesicles at the cell surface which then fuse with LAMP1-mRFP labeled lysosomes. This process is disrupted by dominant negative mutants of Arf6, suggesting that it is a form of macropinocytosis. In addition, rapid APP transport from the Golgi to the lysosome is disrupted by siRNAs encoding the adaptor protein AP-3. These rapid direct transport pathways for APP to the lysosome suggests that the lysosome might be an important site for APP processing. Future work will attempt to assess the relationship between APP transport and beta-amyloid production.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,002 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».