ROCK inhibitor improves survival of cryopreserved serum/feeder-free single human embryonic stem cells
Notice bibliographique
Résumé
BACKGROUND: Efficient slow freezing protocols within serum-free and feeder-free culture systems are crucial for the clinical application of human embryonic stem (hES) cells. Frequently, however, hES cells must be cryopreserved as clumps when using conventional slow freezing protocols, leading to lower survival rates during freeze-thaw and limiting their recovery and growth efficiency after thawing, as well as limiting downstream applications that require single cell suspensions. We describe a novel method to increase freeze-thaw survival and proliferation rate of single hES cells in serum-free and feeder-free culture conditions. METHODS: hES cells maintained on Matrigel-coated dishes were dissociated into single cells with Accutase and slow freezing. After thawing at 37 degrees C, cells were cultured in mTeSR medium supplemented with 10 microM of Rho-associated kinase inhibitor Y-27632 for 1 day. RESULTS: The use of Y-27632 and Accutase significantly increases the survival of single hES cells after thawing compared with a control group (P < 0.01). Furthermore, by treatment of hES cell aggregates with EGTA to disrupt cell-cell interaction, we show that Y-27632 treatment does not directly affect hES cell apoptosis. Even in the presence of Y-27632, hES cells deficient in cell-cell interaction undergo apoptosis. Y-27632-treated freeze-thawed hES cells retain typical morphology, stable karyotype, expression of pluripotency markers and the potential to differentiate into derivatives of all three germ layers after long-term culture. CONCLUSIONS: The method described here allows for cryopreservation of single hES cells in serum-free and feeder-free conditions and therefore we believe this method will be ideal for current and future hES cell applications that are targeted towards a therapeutic end-point.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».