An Isotopically Coded CID-cleavable Biotinylated Cross-linker for Structural Proteomics
Notice bibliographique
Résumé
Successful application of cross-linking combined with mass spectrometry for structural proteomics demands specifically designed cross-linking reagents to address challenges in the detection and assignment of cross-links. A combination of affinity enrichment, isotopic coding, and cleavage of the cross-linker is beneficial for detection and identification of the peptide cross-links. Here we describe a novel cross-linker, cyanurbiotindipropionylsuccinimide (CBDPS), that allows affinity enrichment of cross-linker-containing peptides with avidin. Affinity enrichment eliminates interfering non-cross-linked peptides and allows the researcher to focus on the analysis of the cross-linked peptides. CBDPS is also isotopically coded and CID-cleavable. The cleaved fragments still contain a portion of the isotopic label and can therefore be distinguished from unlabeled fragments by their distinct isotopic signatures in the MS/MS spectra. This cleavage information has been incorporated into a program for the automatic analysis of the MS/MS spectra of the cross-links. This allows rapid determination of cross-link type in addition to facilitating identification of the individual peptides constituting the interpeptide cross-links. Thus, affinity enrichment combined with isotopic coding and CID cleavage allows in-depth mass spectrometric analysis of the peptide cross-links. We have characterized the performance of CBDPS on the 120-kDa protein heterodimer of HIV reverse transcriptase.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».