Permanent Activation of the Human P-glycoprotein by Covalent Modification of a Residue in the Drug-binding Site
Notice bibliographique
Résumé
The human multidrug resistance P-glycoprotein (ABCB1) transports a broad range of structurally diverse compounds out of the cell. The transport cycle involves coupling of drug binding in the transmembrane domains with ATP hydrolysis. Compounds such as verapamil stimulate ATPase activity. We used cysteine-scanning mutagenesis of the transmembrane segments and reaction with the thiol-reactive substrate analog of verapamil, methanethiosulfonate (MTS)-verapamil, to test whether it caused permanent activation of ATP hydrolysis. Here we report that one mutant, I306C(TM5) showed increased ATPase activity (8-fold higher than untreated) when treated with MTS-verapamil and isolated by nickel-chelate chromatography. Drug substrates that either enhance (calcein acetoxymethyl ester, demecolcine, and vinblastine) or inhibit (cyclosporin A and trans-(E)-flupentixol) ATPase activity of Cys-less or untreated mutant I306C P-glycoprotein did not affect the activity of MTS-verapamil-treated mutant I306C. Addition of dithiothreitol released the covalently attached verapamil, and ATPase activity returned to basal levels. Pretreatment with substrates such as cyclosporin A, demecolcine, verapamil, vinblastine, or colchicine prevented activation of mutant I306C by MTS-verapamil. The results suggest that MTS-verapamil reacts with I306C in a common drug-binding site. Covalent modification of I306C affects the long range linkage between the drug-binding site and the distal ATP-binding sites. This results in the permanent activation of ATP hydrolysis in the absence of transport. Trapping mutant I306C in a permanently activated state indicates that Ile-306 may be part of the signal to switch on ATP hydrolysis when the drug-binding site is occupied.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».