An Improved Method for Production of Recombinant Human Glutamic Acid Decarboxylase 65 for Use in Phytopharmaceutical Assessment
Notice bibliographique
Résumé
The pharmacological activity of neuroactive phytochemicals on recombinant human glutamic acid decarboxylase 65 (hGAD65) was investigated. GAD catalyzes the conversion of glutamic acid to γ-aminobutyric acid (GABA), which acts as an important inhibitory neurotransmitter in the central nervous system (CNS). We describe an improved method in which recombinant hGAD65 was expressed at high levels using a maltose binding protein (MBP) fusion system. The expression and purification process was superior to the commonly used glutathioneS.-transferase (GST) fusion partner. The in vitro. system developed here detected both enzyme inhibition and stimulation, under varying pyridoxal-5′-phosphate (PLP) concentrations. The known GAD inhibitor, 3-mercaptopropionic acid, was tested as a positive control and had an IC50 = 12.3 μ M. Phytochemicals were tested (10 μ g/mL) for their effects on in vitro. hGAD65 activity. Minor inhibition was seen with the ethanol extract of Panax quinquefolius. L. (ginsenosides) (23%), betulinic acid (27%), and valerenic acid (20%). An increase in hGAD65 activity by approximately 20% was observed with bilobalide and asiaticoside. As a result, these small changes in GAD activity may have physiologic implications. The possibility that phytochemicals influence GABAergic neurotransmission in vivo. and the mechanisms by which it may occur is discussed.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,002 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».