Targeted Gene Knock In and Sequence Modulation Mediated by a Psoralen-linked Triplex-forming Oligonucleotide*
Notice bibliographique
Résumé
Information from exogenous donor DNA can be introduced into the genome via homology-directed repair (HDR) pathways. These pathways are stimulated by double strand breaks and by DNA damage such as interstrand cross-links. We have employed triple helix-forming oligonucleotides linked to psoralen (pso-TFO) to introduce a DNA interstrand cross-link at a specific site in the genome of living mammalian cells. Co-introduction of duplex DNA with target region homology resulted in precise knock in of the donor at frequencies 2-3 orders of magnitude greater than with donor alone. Knock-in was eliminated in cells deficient in ERCC1-XPF, which is involved in recombinational pathways as well as cross-link repair. Separately, single strand oligonucleotide donors (SSO) were co-introduced with the pso-TFO. These were 10-fold more active than the duplex knock-in donor. SSO efficacy was further elevated in cells deficient in ERCC1-XPF, in contrast to the duplex donor. Resected single strand ends have been implicated as critical intermediates in sequence modulation by SSO, as well as duplex donor knock in. We asked whether there would be a competition between the donor species for these ends if both were present with the pso-TFO. The frequency of duplex donor knock in was unaffected by a 100-fold molar excess of the SSO. The same result was obtained when the homing endonuclease I-SceI was used to initiate HDR at the target site. We conclude that the entry of double strand breaks into distinct HDR pathways is controlled by factors other than the nucleic acid partners in those pathways.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».