Abstract 478: Single-Cell Isolation and Analysis of Viable Proliferating Macrophages From Atherosclerotic Plaques
Notice bibliographique
Résumé
INTRODUCTION: We have recently shown that the proliferation of macrophages within the atherosclerotic plaque, rather than the recruitment of new monocytes from the blood is the key driver of plaque growth in established atherosclerosis. The study of proliferating macrophages has been hampered by the lack of a technique for identifying proliferating macrophages and isolating them from the atherosclerotic plaque in a viable state. OBJECTIVE: Develop and validate a process for identifying proliferating macrophages in atherosclerotic lesions, and isolating them as single, viable cells, then perform a molecular characterization of these cells. METHODS: ApoE-/- and LDLR-/- mice were fed a diet high in fat and cholesterol. Atherosclerotic aortas were collected, and cells were isolated by mechanical and enzymatic dissociation. Cells were stained using fluorescent markers and DNA-binding dyes, then analyzed and isolated by fluorescence-activated cell sorting. RESULTS: Mincing and enzymatic digestion in collagenase I, collagenase XI, DNAse, and hyaluronidase optimally isolates macrophages from aortic explants. Cell-surface staining with fluorescent antibodies against B220, F4/80, Ly6c, MHC II, and CD11b allows identification of lesional macrophages. DNA staining with Vybrant DyeCycle Violet allows identification of proliferating cells. Combined, these processes allow for the FACS-based sorting of viable proliferating macrophages from atherosclerotic plaque, and subsequent RNA or protein analysis, or culture. CONCLUSIONS: The process described here allows the first-ever viable isolation of proliferating macrophages from atherosclerotic plaques. This will permit the investigation of molecular targets to interfere with the pathogenesis of atherosclerosis.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,006 | 0,005 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».