Real‐time measurement of transport activity of the human concentrative nucleoside transporter, hCNT3, using a fluorescent reporter
Notice bibliographique
Résumé
Human concentrative nucleoside transporter, hCNT3, mediates Na + /nucleoside co‐transport, with a low turnover rate (10 nucleoside molecules s −1 ). hCNT3 also supports H + ‐coupled uridine transport, as measured in X. laevis oocytes. We used a new approach to monitor H + /uridine co‐transport in mammalian cells. We fused mNectarine, a new H + ‐sensitive red fluorescent protein, to the N‐terminus of hCNT3 to generate mNect‐hCNT3. Fusion of the fluorescent H + sensor enabled measurement of pH at the intracellular surface of hCNT3. mNectarine fluorescence was monitored in human embryonic kidney 293 cells expressing mNect‐hCNT3 or, as a negative control, cytosolic mNectarine and catalytically dead mutant of the AE1 Cl − /HCO 3 − exchanger, AE1‐P652C. mNectarine fluorescence values were calibrated for pH using the nigericin/high K + clamping method. Cells were incubated at the permissive pH for H + ‐coupled nucleoside transport, pH 5.5, under Na + ‐free conditions. At this pH there was a continuous cytosolic acidification. In mNect‐hCNT3 expressing cells (but not under negative control conditions) the rate of acidification increased upon addition of 0.5 mM uridine, consistent with H + ‐coupled uridine transport. We conclude that mNect‐hCNT3 acts as a sensitive self‐referencing sensor of nucleoside transport. Research is supported by the Canadian Institutes of Health Research and the National Cancer Institute of Canada.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,001 |
| Communication savante | 0,001 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».