Abstract 156: Development of a New Bioactivatable Fluorescent Probe for the Study of the Proteolytic Activities Degrading Apolipoprotein A-I in vitro and in vivo
Notice bibliographique
Résumé
Introduction and Objective: The possible benefits of high-density lipoproteins (HDL) against atherosclerosis have been largely attributed to its major protein component, apolipoprotein A-I (apoA-I). However, apoA-I can be degraded by diverse processes, including proteases localized in atherosclerotic plaques, which could reduce the effectiveness of HDL-based therapies. Here we describe the development of a new bioactivatable near-infrared apoA-I-Cy5.5 fluorescent probe and its initial use in the assessment of proteolytic activities that degrade apoA-I in vitro, in vivo and ex vivo. Methods and Results: Fluorescence emission of our probe is quenched by saturation of Cy5.5 fluorophore molecules on the full-length apoA-I protein. In vitro proteolysis of the apoA-I probe showed up to 11-fold increase of near-infrared fluorescence (n=5, P ≤ 0.05). Using this apoA-I-Cy5.5 probe, we were able to quantify proteolytic activities from a wide range of proteases targeting serine (chymase), cysteine (cathepsin S) and metalloproteases (MMP-12). Also, we detected activation of the apoA-I-Cy5.5 probe on aortic cryosections from Ldlr-/--Tg for human apoB atherosclerotic (ATX) mice using an in situ zymography assay and observed that broad-spectrum protease inhibitors protect the probe from protease activities, as shown by decreased fluorescence compared to conditions without protease inhibitors (-54%, n= 6 per group, P ≤ 0.001). In vivo, using a combined Fluorescence Molecular Tomography-Magnetic Resonance imaging system, the injected probe exhibited a trend for increased fluorescence in the aorta when infused in ATX mice compared to C57BL/6J wild-type mice. Ex vivo imaging of these aortas showed a 10-fold increase of fluorescence in ATX (n=5) mice compared to CTL (n=3) mice (P ≤ 0.05). Conclusion: Given the potential importance of HDL functionality in the assessment of cardiovascular risk, this novel protease-activatable apoA-I probe may help to improve HDL-based therapies through better characterization of the alterations of functionality of apoA-I or lipid-poor HDL particles in different pathophysiological settings.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,003 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».