Subzero Temperature Chromatography and Top-Down Mass Spectrometry for Protein Higher-Order Structure Characterization: Method Validation and Application to Therapeutic Antibodies
Notice bibliographique
Résumé
Characterization of the higher-order structure and structural dynamics of proteins is crucial for in-depth understanding of their functions. Amide hydrogen/deuterium exchange (HDX), monitored by mass spectrometry (MS), is now a popular technique for measuring protein higher-order structural changes. Although the proteolysis-based HDX-MS approach is most commonly used, the "top-down" approach, which fragments intact proteins directly using electron-based dissociation, is becoming an important alternative and has several advantages. However, the commonly used top-down strategies are direct-infusion based and thus can only be used with volatile buffers. This has meant that the "top-down" approach could not be used for studying proteins under physiological conditions-the very conditions which are often very important for preserving a protein's native structure and function. More complex proteins such as those with disulfide bonds present another challenge. Therefore, there is significant interest in developing novel top-down HDX methods that are applicable to all types of protein samples. In this paper, we show how top-down electron capture dissociation and subzero temperature HPLC can be combined and used for this purpose. This method keeps the back-exchange level as low as 2% and has no limitations in terms of protein type and sample solution conditions. Close to single-residue level protein structural information can be generated. The new method is validated through comparison with NMR data using calmodulin as a model protein. Its capability of determining structural changes in therapeutic antibodies (Herceptin) is also demonstrated.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».