O3–07–05: Arf6 controls rapid lysosomal transport of cell surface APP and beta‐amyloid production by macropinocytosis
Notice bibliographique
Résumé
Many experiments show that beta-amyloid peptides are generated by the cleavage of the Amyloid Precursor Protein (APP) after internalization from the cell surface. The rapid production of beta-amyloid from cell surface APP has led many to believe that endosomes are the responsible compartment but this has never been directly demonstrated. Work in our laboratory has demonstrated that APP and gamma secretase proteins and activity are enriched in the lysosome, suggesting that this compartment might participate in beta-amyloid production. Furthermore we have recently identified a novel pathway that is able to transport APP directly from the cell surface to the lysosome, suggesting a new pathway for beta-amyloid production. To characterize lysosomal APP trafficking from the cell surface, we generated constructs with an N-terminal (extracellular) HA epitope tag. Early endosomes and lysosomes were identified using fluorescent protein-tagged rab5 and LAMP1. We then transfected SN56 cells with these constructs and surface labeled the cells with a fluorescent (or gold) labeled anti-HA antibody. Internalization was then followed using laser scanning confocal microscopy and electron microscopy. To characterize this pathway, we screened a panel of fluorescently-tagged dominant negative regulatory proteins. Beta-amyloid production was quantitated by ELISA. Arf6 expression in the hippocampus of normal and AD individuals was examined by immunohistochemistry. Here, we demonstrate that APP is transported to lysosomes within minutes by way of large (>500nm) structures that are too large to be clathrin coated vesicles. By electon microscopy, these are large clear vesicles characteristic of macropinosomes. This process is inhibited by dominant negative mutations in Arf6, as well as Arf6 Knockdown by siRNA. We also find that Arf6 is expressed in in the hippocampal CA1 region of AD and control tissues, but spreads throughout the hippocampus (including CA3 and 4 regions) in individuals with AD. Arf6 dominant negative constructs markedly reduce beta-amyloid production. These experiments demonstrate that Arf6 controls macropinocytosis of cell surface APP to lysosomes and beta-amyloid production. Therefore Arf6 may be a therapeutic target in AD.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,001 | 0,001 |
| Communication savante | 0,001 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,006 | 0,004 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».