Submillisecond Protein Folding Events Monitored by Rapid Mixing and Mass Spectrometry-Based Oxidative Labeling
Notice bibliographique
Résumé
Kinetic measurements can provide insights into protein folding mechanisms. However, the initial (submillisecond) stages of folding still represent a formidable analytical challenge. A number of ultrarapid triggering techniques have been available for some time, but coupling of these techniques with detection methods that are capable of providing detailed structural information has proven to be difficult. The current work addresses this issue by combining submillisecond mixing with laser-induced oxidative labeling. Apomyoglobin (aMb) serves as a model system for our measurements. Exposure of the protein to a brief pulse of hydroxyl radical (·OH) at different time points during folding introduces covalent modifications at solvent accessible side chains. The extent of labeling is monitored using mass spectrometry-based peptide mapping, providing spatially resolved measurements of changes in solvent accessibility. The submillisecond mixer used here improves the time resolution by a factor of 50 compared to earlier ·OH labeling experiments from our laboratory. Data obtained in this way indicate that early aMb folding events are driven by both local and sequence-remote docking of hydrophobic side chains. Assembly of a partially formed A(E)G(H) scaffold after 0.2 ms is followed by stepwise consolidation that ultimately yields the native state. Major conformational changes go to completion within 0.1 s. The technique introduced here is capable of providing in-depth structural information on very short time scales that have thus far been dominated by low resolution (global) spectroscopic probes. By employing submillisecond mixing in conjunction with slower mixing techniques, it is possible to observe complete folding pathways, from fractions of a millisecond all the way to minutes.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,012 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».