NOVEL LOCALIZATION OF OCTN1, AN ORGANIC CATION/CARNITINE TRANSPORTER, TO MAMMALIAN MITOCHONDRIA: IMPLICATIONS FOR CARNITINE-RESPONSIVE ENCEPHALOPATHY AND MYOPATHY
Notice bibliographique
Résumé
Objectives: To determine the cellular localization of the organic cation/carnitine transporter, OCTN1. Carnitine is a zwitterion essential for the ß-oxidation of fatty acids. Methods: We made GFP- and RFP-human OCTN1 cDNA constructs and transfected them into several mammalian cell lines (e.g.HepG2, human skin fibroblasts, HEK 293, MEF-3T3). We immunostained the GFP-hOCTN1 transfected cells with different intracellular markers and then applied confocal fluorescent microscopy. We measured L-[3H]-carnitine uptake in freshly isolated mitochondria of GFP-hOCTN1 transfected HepG2. We also measured uptake in mutant human skin fibroblasts having <1% of carnitine acylcarnitine translocase (CACT) activity (alternate mitochondrial carnitine transporter). Results: Immunostaining of GFP-hOCTN1 transfected cells with different intracellular markers and confocal fluorescent microscopy analysis demonstrated mitochondrial expression of OCTN1. There was striking co-localization of an RFP-hOCTN1 fusion protein and a mitochondrial-GFP marker construct in transfected MEF-3T3 and no co-localization of GFP-hOCTN1 in transfected human skin fibroblasts with other intracellular markers. L- [3H]-carnitine uptake in freshly isolated mitochondria of GFP-hOCTN1 transfected HepG2 demonstrated a Km of 422µM and western blot with an anti-GFP antibody identified a GFP-hOCTN1 fusion protein (90kDa). We showed endogenous expression of native OCTN1 in HepG2 mitochondria with anti-GST-hOCTN1 antibody. Further, we definitively confirmed intact L-[3H]-carnitine uptake (Km 1324µM) solely attributable to OCTN1 in isolated mitochondria of mutant human skin fibroblasts having <1% of CACT activity. Conclusion: This mitochondrial localization suggests an important yet different role for OCTN1 from other OCTN family members in intracellular carnitine homeostasis. The predicted clinical phenotype for a defect in the OCTN1 transporter may parallel the myopathic and episodic hypoketotic hypoglycemic encephalopathy phenotypes of the high-affinity plasmalemmal carnitine transporter, OCTN2 and CACT defects.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».