Soluble expression in Escherichia coli of functional ScFv of monoclonal antibody MC5 against human colorectal carcinoma
Notice bibliographique
Résumé
ObjectiveTo prepare functional soluble single chain va ri able fragment(ScFv) of monoclonal antibody(McAb) MC5 against human colorectal ca rcinoma.Methods mRNA was isolated from the MC5 producing hybr idoma cell line and the DNAs encoding variable domains of heavy and light chains (VH and VL)of the antibody were amplified separately by RT PCR and assembled into ScFv DNA with a linker DNA. The ScFv DNA was ligated into the phagemid vect or pCANTAB5E and the ligated sample was transformed into E.coli TG1. The tra nsfo rmed cells were infected with M13KO7 helper phage to yield recombinant phages. A fter two rounds of panning with human colorectal carci noma cell line SW480 highl y expressing MC5 binding antigen, the phage clones displaying ScFvs of MC5 were selected by ELISA. Two phage clones showing strong signal in ELISA were used to infect E.coli HB2151 to express soluble ScFvs. The soluble ScFvs were ident ified by Dot blot and Western blot, and their antigen binding activities were a ssayed by ELISA.Results VH,VL and ScFv DNAs were about 340, 320 and 750 bp respectively. 10 antigen positive phage clones were selected from 25 preselected phage clones by ELISA. Both the soluble ScFvs derived from the 2 out of the 10 antigen positive phage clones were about 32 000 u and concentra ted in periplasmatic space, and could bind the antigen, and shared the same bind ing site with parental McAb MC5. Conclusion The functional solu ble ScFv of MC5 is successfully produced, which may provide a possible novel tar geting vehicle for in vitro and potential in vivo studies on human color ectal carcinoma.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».