Expression of a Wheat Endosperm 14-3-3 Protein and Its Interactions with Starch Biosynthetic Enzymes in Amyloplasts
Notice bibliographique
Résumé
Wheat endosperm starch is the major determinant of grain yield and processing quality.The quality and quantity of starch are controlled by a number of starch biosynthetic enzymes.14-3-3 proteins,involved in many biological processes,are ubiquitous and important regulators in all eukaryotic cells from yeast to mammals and plants.Protein-protein interactions between a wheat endosperm 14-3-3 protein and starch biosynthetic enzymes from amyloplast were investigated in this study.A 14-3-3 gene was cloned from developing wheat endosperm and inserted into plasmid vectors pET29c and pET41c.The recombinant vectors were transformed into Escherichia coli strain BL21-CodonPlus(DE3)-RP and expressed at very high level.The fusion protein existed mainly as an insoluble inclusion body after extraction by BugBuster Protein Extraction Reagent.The soluble fusion protein was purified by bounding to S-protein agarose,while the inclusion body should be dissolved in 8 mol L- 1urea and refolded firstly.Sucrose synthase activity was observed to be inhibited by exogenous recombinant 14-3-3 protein in a dosage-dependent manner,which suggested the refolded protein was successfully activated and could be used in the following research.The purified recombinant 14-3-3 protein was bound to S-protein agarose as a biochemical bait,and then incubated with wheat amyloplast extract.Proteins interacting specifically with the 14-3-3 protein and remaining on the resin were analyzed by SDS-PAGE and Western blot.These assays showed that starch synthase I(SSI),starch synthase II(SSII),starch branching enzyme IIa(SBEIIa),starch branching enzyme IIb(SBEIIb),and ADP glucose pyrophosphorylase large subunit(SH2)interacted with 14-3-3 protein,whereasSBEI,starch phosphorylase(SP),D-enzyme(DE),and ADP glucose pyrophosphorylase small subunit(BT2)did not bind with the 14-3-3 protein.The results suggest a role for the wheat endosperm 14-3-3 protein in regulation of grain starch biosynthetic enzymes.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».