Expression and Purification of Heat Shock Protein 65(HSP65) of Mycobacterium leprae and Preparation of Anti-HSP65 Polyclonal Antiserum
Notice bibliographique
Résumé
Objective To express the heat shock protein 65(HSP65) of Mycobacterium leprae in prokaryotic cells,purify the expressed product and prepare anti-HSP65 polyclonal antiserum.Methods The hsp65 gene was amplified by PCR using plasmid pCMV4.65 carrying the target gene as a template,and cloned into vector pET-28a(+).The constructed recombinant plasmid pET-28a-hsp65 was transformed to E.coli BL21(DE3) for expression under induction of IPTG.The expressed product was purified by nickel ion affinity chromatography and used for immunization of BALB/c mice to prepare antiserum.The reactogenicity of recombinant HSP65 was analyzed by Western blot.Results Both restriction analysis and sequencing proved that recombinant plasmid pET-28a-hsp65 was constructed correctly.The expressed recombinant HSP65,with a relative molecular mass of about 65 000,contained about 30% of total somatic protein and mainly existed in a form of inclusion body.The purity and concentration of purified recombinant HSP65 were 95% and about 1.0 mg/ml respectively.The prepared anti-HSP65 antiserum reached a titer of 1 ∶ 12 800,and showed high reactogenicity.Conclusion The recombinant HSP65 of M.leprae was successfully expressed and purified,and anti-HSP65 polyclonal antiserum was prepared,which laid a foundation of further study on HSP65-based subunit vaccine and DNA vaccine.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».