N‐Linked Glycosylation Is Required for Vacuolar H<sup>+</sup>‐ATPase (V‐ATPase) <i>a4</i> Subunit Stability, Assembly, and Cell Surface Expression
Notice bibliographique
Résumé
ABSTRACT The a subunit is the largest of 14 different subunits that make up the V‐ATPase complex. In mammalian species this membrane protein has four paralogous isoforms, a1 – a4 . Clinically, a subunit isoforms are implicated in diverse diseases; however, little is known about their structure and function. The subunit has conserved, predicted N‐glycosylation sites, and the a3 isoform has been directly shown to be N‐glycosylated. Here we ask if human a4 (ATP6V0A4) is N‐glycosylated at the predicted site, Asn489. We transfected HEK 293 cells, using the pCDNA3.1 expression‐vector system, to express cDNA constructs of epitope‐tagged human a4 subunit, with or without mutations to eliminate the putative glycosylation site. Glycosylation was characterized also by treatment with endoglycosidases; expression and localization were assessed by immunoblotting and immunofluorescence. Endoglycosidase‐treated wild type (WT) a4 showed increased relative mobility on immunoblots, compared with untreated WT a4 . This relative mobility was identical to that of unglycosylated mutant a4 N489D , demonstrating that the a4 subunit is glycosylated. Cycloheximide pulse‐chase experiments showed that the unglycosylated subunit degraded at a higher rate than the N‐glycosylated form. Unglycosylated a4 was degraded mostly in the proteasomal pathway, but also, in part, through the lysosomal pathway. Immunofluorescence colocalization data showed that unglycosylated a4 was mostly retained in the ER, and that plasma membrane trafficking was defective. Co‐immunoprecipitation studies suggested that a4 N489D does not assemble with the V‐ATPase V 1 domain. Taken together, these data show that N‐glycosylation plays a crucial role in a4 stability, and in V‐ATPase assembly and trafficking to the plasma membrane. J. Cell. Biochem. 117: 2757–2768, 2016. © 2016 Wiley Periodicals, Inc.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».