Cloning Expression and Purification of Heat Shock Protein HSP60 from Hyperthermophilic Archaeon Pyrococcus furiosus
Notice bibliographique
Résumé
[Objective] The aim was to study the cloning,expression and purification method of heat shock protein HSP60 from Hyperthermophilic Archaeon Pyrococcus furiosus.[Method] The homology analysis of Pfu-HSP60 gene sequence was taken by using Canada HSP60 database and sequence comparative tools of BLAST and FASTA.HSP60 gene was amplified in vitro and cloned and expressed in Escherichia coli.Pfu-HSP60 protein was also purified.[Result] With the Taq enzyme as DNA polymerase,the anticipative Pfu-HSP60 gene was amplified by PCR method,then it was inserted in plasmid pET-21a and transformed into E.coli BL21-Codonplus(DE)3-RIL.The soluble high expressive protein was obtained after induced by 0.1 mmol/LIPTG for 2 h.After ultrasonic and centrifugation,the supernate was heated at 85 ℃ and centrifuged again,then the primary purified Pfu-HSP60 protein was obtained and then it was purified by DEAE Sepharose Fast Flow anion exchange chromatography.After the collected peak was filtered and concentrated,the Pfu-HSP60 protein peak was collected through Sephacryl S-200 gel filtration column.The purity of the recombinant protein Pfu-HSP60 was 94.5% and the total yield was 28.0%.[Conclusion] The research laid the foundation for the study of the structure and function of Pfu-HSP60 protein and the study of the interaction mechanism with other HSP.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».