GC-Rich Template Amplification by Inverse PCR: DNA Polymerase and Solvent Effects
Notice bibliographique
Résumé
The amplification of GC-rich templates by any PCR method is usually a difficult task and despite the development of modified methods and conditions, this type of amplification still remains a specific case approach. Problems usually observed with GC-rich DNA are constraint of template amplification by stable secondary structures that stall or reduce the DNA polymerase progress, and the presence of secondary annealing sites giving rise to nonspecific amplified bands. This latter point is not exclusive to GC-rich templates but is frequently encountered in other types of templates. In order to design a more general method for GC-rich templates, different DNA polymerases were compared in combination with different organic solvents with the purpose of abolishing stable secondary structures (). Our attention focused on the inverse polymerase chain reaction (iPCR) used to perform site-directed mutagenesis ( ). This very attractive method req⪚res a single pair of primers and involves the amplification of the whole recombinant plasmid, a difficult step with high GC-content DNA. Inverse PCR also proves useful in cloning missing parts of genes by using a self-ligated genomic DNA fragment as template.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».