Targeted Gene Deletion in Aspergillus fumigatus Using the Hygromycin-Resistance Split-Marker Approach
Notice bibliographique
Résumé
The construction of a fungal strain that lacks a specific gene product is often accomplished by replacing the gene of interest with a selection marker using site-specific recombination. Transformation of Aspergillus fumigatus, like many related fungal species, must overcome two major obstacles. First, the cell wall limits the entry of exogenous DNA, and second, a high rate of nonhomologous recombination leads to random ectopic integration of the marker. Here, we describe an experimental strategy that has been successfully used to overcome these challenges through protoplast transformation with split-marker cassettes. Each cassette is constructed to contain sequences flanking the gene of interest fused to an incomplete fragment of a dominant selection marker. The resistance marker is only functional if both fragments undergo recombination to regenerate an intact resistance cassette. This event is favored by the proximity of the DNA constructs that arises as a result of homologous recombination between the target-gene sequences in the deletion construct with the fungal chromosome. A similar strategy can be employed using a second resistance marker to complement the deletion mutant with an intact allele of the gene of interest.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,003 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».