A Modular, Tn <i>7</i> -Based System for Making Bioluminescent or Fluorescent Salmonella and Escherichia coli Strains
Notice bibliographique
Résumé
UNLABELLED: Our goal was to develop a robust tagging method that can be used to track bacterial strains in vivo To address this challenge, we adapted two existing systems: a modular plasmid-based reporter system (pCS26) that has been used for high-throughput gene expression studies in Salmonella and Escherichia coli and Tn7 transposition. We generated kanamycin- and chloramphenicol-resistant versions of pCS26 with bacterial luciferase, green fluorescent protein (GFP), and mCherry reporters under the control of σ(70)-dependent promoters to provide three different levels of constitutive expression. We improved upon the existing Tn7 system by modifying the delivery vector to accept pCS26 constructs and moving the transposase genes from a nonreplicating helper plasmid into a temperature-sensitive plasmid that can be conditionally maintained. This resulted in a 10- to 30-fold boost in transposase gene expression and transposition efficiencies of 10(-8) to 10(-10) in Salmonella enterica serovar Typhimurium and E. coli APEC O1, whereas the existing Tn7 system yielded no successful transposition events. The new reporter strains displayed reproducible signaling in microwell plate assays, confocal microscopy, and in vivo animal infections. We have combined two flexible and complementary tools that can be used for a multitude of molecular biology applications within the Enterobacteriaceae This system can accommodate new promoter-reporter combinations as they become available and can help to bridge the gap between modern, high-throughput technologies and classical molecular genetics. IMPORTANCE: This article describes a flexible and efficient system for tagging bacterial strains. Using our modular plasmid system, a researcher can easily change the reporter type or the promoter driving expression and test the parameters of these new constructs in vitro Selected constructs can then be stably integrated into the chromosomes of desired strains in two simple steps. We demonstrate the use of this system in Salmonella and E. coli, and we predict that it will be widely applicable to other bacterial strains within the Enterobacteriaceae This technology will allow for improved in vivo analysis of bacterial pathogens.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».