Preparation and Characterization of Posttranslationally Modified Tubulins From Artemia franciscana
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Notice bibliographique
Résumé
Tubulin heterogeneity within eukaryotic cells is generated by differential gene expression and posttranslational modification of alpha- and beta-tubulin gene products, either as heterodimers or when polymerized into microtubules. The characterization of posttranslationally modified tubulins from the crustacean Artemia franciscana is presented, although tubulins from other sources can be studied with these procedures. Tubulin is prepared from cell free extracts by taxol-induced assembly and centrifugation of microtubules through sucrose cushions, which also yields microtubule-associated proteins, or it is purified to apparent homogeneity by relatively simple chromatographic procedures and assembly/disassembly steps. To detect posttranslationally modified tubulins protein samples are electrophoresed in sodium dodecyl sulfate (SDS) polyacrylamide gels, blotted to nitrocellulose membranes and probed with isoform-specific antibodies. Isotubulins, for which gene-encoded amino acid differences and posttranslational modifications generate charge variations, are resolved in two-dimensional gels using isoelectric focusing followed by SDS polyacrylamide gel electrophoresis, a procedure useful for resolution of microtubule-associated proteins. Isoforms patterns are visualized by Coomassie blue and/or silver staining and individual isoforms are identified by antibody reactivity on Western blots. Tubulin isoforms are localized in Artemia by immunofluorescent staining of larvae. The focus of this chapter is the purification of tubulin from a nonneural source and characterization of tyrosinated, detyrosinated, and nontyrosinatable alpha-tubulins using polyclonal antibodies made to carboxy-terminal peptides of each isoform.
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Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découle