Electroporation of Adherent Cells In Situ for the Introduction of Nonpermeant Molecules
Notice bibliographique
Résumé
Electroporation has been used for the introduction of DNA ( 1 – 4 ), proteins ( 5 – 7 ), and various nonpermeant drugs and metabolites into cultured mammalian cells ( 8 , 9 ), as described in this and other volumes ( 10 , 11 ). Most electroporation techniques for adherent cells involve the delivery of the electrical pulse while the cells are in suspension ( 5 , 12 ). However, the detachment of these cells from their substratum by trypsin or EDTA can cause metabolic alterations that may lead to cell death or increase the cells’ sensitivity to additional damaging agents ( 13 ). The efficient incorporation of proteins without cell damage is an especially crucial requirement, since for most proteins of interest and contrary to DNA, no convenient large-scale method exists for the selection of viable from damaged cells or cells where no protein introduction took place after electroporation. Therefore, for studies using adherent cells, it is imperative to deliver the pulse while the cells are attached to their solid substratum. This has been achieved using a variety of methods ( 14 , 15 ). In this chapter, we describe a technique where cells are grown and electroporated on a glass surface coated with electrically conductive, optically transparent indium-tin oxide. This coating allows the direct visualization of the electroporated cells and offers the possibility of ready examination owing to their extended morphology. Moreover, it is very durable, inert, nontoxic to the cells, and promotes excellent cell adhesion and growth. An added advantage is the fact that, unlike many plastics, indium-tin oxide does not exhibit any spontaneous fluorescence, making the examination of the electroporated cells under a fluorescent microscope possible. These keywords were added by machine and not by the authors. This process is experimental and the keywords may be updated as the learning algorithm improves.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,003 | 0,002 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».