Isolation of Porcine Testis Cells from Fresh and Preserved Tissues.
Notice bibliographique
Résumé
Gonocytes are the first identifiable germ cells in the testis and progenitors of spermatogonial stem cells. The objective of this study was to maximize gonocyte isolation yield to facilitate the in vitro study and manipulation of these male germline stem cells. Fresh testis tissues from 3-day-old piglets were subjected to mechanical dissociation (Protocols 1: Teasing, 2: Mincing, 3: Sieving, or 4: Grinding), enzymatic digestion (Protocol 5: Collagenase IV (Col)-Dnase1, 6: Col-Dnase1+Col-Dnase1, 7: Col-Dnase1+ Trypsin-EDTA, or 8: Col-Dnase1-Hyaluronidase+Trypsin-EDTA) and enzymatic digestion under cold temperature or pressurized conditions (Protocols 9: Col-Dnase1 for 5-hrs at 4°C followed by 37°C digestion, 10: Col-Hyaluronidase-Dnase1 for 5-hrs at 4°C + Trypsin-EDTA, 11: Pressurized-Col-Dnase1 for 5-hrs at 4°C + 37°C digestion, or 12: Pressurized-Col-Hyaluronidase-Dnase1 for 5-hrs at 4°C +Trypsin-EDTA) (n = 7 replicates each). Additionally, intact testes and testis tissue fragments (30 mg and 100 mg) were maintained at 4°C with PBS, DMEM, Liebovitzs L-15, L-15 with FBS (10%, 20% or 50%), Ham-F10, M199 or HypoThermosol-FRS for 6 days. On preservation Day 0, Day 3 and Day 6, testis tissues were digested (n = 6), and fixed for semi-quantitative morphological analyses (n = 4). Enzymatic methods resulted in the recovery of significantly more testis cells with significantly higher viability than mechanical dissociation methods, while Protocol 10 resulted in the highest cell yield (mean ± SEM, 27.14 ± 0.83×106 per 100-mg testis tissue) and viability (95.91% ± 2.56), Protocol 4 had the lowest viability (36.17% ± 2.29) and Protocol 3 had the lowest cell yield (3.25 ± 0.84×106). Of the enzymatic digestion protocols, Protocol 8 yielded the highest total live cell number (22.72 ± 2.44×106) and its efficiency was significantly increased by cold enzyme treatment (26.02 ± 1.27×106). Compared to fresh tissue dissociation, total live cell number collected on Day 3 and Day 6 dropped significantly, with HTS-FRS (50.43% ± 16.65, 26.19% ± 17.94) and 20% FBS L-15 (45.94% ± 17.52, 21.43% ± 11.19) consistently resulting in the highest numbers. These two media also resulted in the best preservation of morphology. In conclusion, digestion of testis tissue with Col-Dnase1-Hyaluronidase followed by Trypsin-EDTA appears superior to other methods and could be enhanced by adding the enzymes during the cold temperature storage, prior to digestion at 37°C. Cooling of testis tissue may decrease the total live cell recovery by approximately 50% by Day 3 and 75% by Day 6. (poster)
Récupéré en direct depuis OpenAlex et désinversé. Les résumés ne sont pas conservés dans cette base de données : les index inversés représentent 8,6 Go des 9,3 Go de texte de la base, et le serveur dispose de 13 Go libres.
Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».