Localization of SRC in Fresh and Capacitated Bull Spermatozoa.
Notice bibliographique
Résumé
Capacitation is a molecular transformation process which enables spermatozoa to undergo the acrosome reaction, and be capable of fertilization. Protein tyrosine phosphorylation is an indicator of capacitation. SRC, a non-receptor protein tyrosine kinase, has been implicated in both protein tyrosine phosphorylation in human sperm capacitation and signaling cascades associated with Na+K+ATPase in somatic cells. Na+K+ATPase acts as a signaling molecule when its specific ligand ouabain binds and activates cytoplasmic protein kinases. We have shown that ouabain induces dose-dependent protein tyrosine phosphorylation during capacitation in bull spermatozoa. To test the hypothesis that Na+K+ATPase activates SRC through a ouabain-induced signaling pathway to promote capacitation in bovine sperm, this study's objectives were to identify and localize SRC in bull sperm and to investigate the effect of ouabain-induced capacitation on SRC. Immunocytochemistry with anti-SRC (rabbit polyclonal anti-SRC, n=3 bulls) detected no SRC in intact unfixed sperm, but sperm with compromised integrity of the plasma membrane (by fixation in 1% formaldehyde or by methanol permeabilization) localized SRC to the acrosomal region, and some permeabilized sperm also showed punctuate localization of SRC in the equatorial region. Therefore SRC does exist in bull sperm, either on the internal surface of the head plasma membrane, or on the outer acrosomal membrane. Western immunoblotting with the same antibody confirmed SRC presence, detecting a 60 kDa band in fresh bull sperm (n=3 bulls) similar to that of the positive control (HeLa Cell Lysate), with bull sperm also showing four higher kDa SRC-positive bands. Sperm were then incubated under capacitating conditions (SP-TALP ± 10 µg/ml heparin or 50 mM ouabain, 5 hours; 37°C; 5% CO2,; n=4 bulls) and identical gels were assessed by Western immunoblotting for protein tyrosine phosphorylation (to evaluate capacitation) and for SRC content. Both heparin and ouabain stimulated tyrosine phosphorylation, confirming capacitation, although ouabain caused significantly more phosphorylation in all affected proteins, and uniquely phosphorylated a 254 kDa protein. The differences in protein tyrosine phosphorylation between heparin and ouabain support our earlier suggestion that these two agents induce capacitation via different mechanisms. Incubation in capacitating conditions affected SRC. All sperm incubated for 5h contained a 24 kDa SRC not present at 0 hours, which is likely a fragment of SRC. Control sperm at 5 hours (0 heparin, 0 ouabain) had more 60 kDa SRC than 0 hour control (P<0.05); inclusion of heparin or ouabain rendered the increase non-significant. These findings demonstrate that SRC is present in bull sperm, primarily located in the anterior acrosomal region, that SRC expression is altered during capacitation and that heparin and ouabain induce capacitation via different pathways that may involve SRC. (poster)
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
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Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,003 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
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score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».