Comments on Methods to Suppress Endogenous β-Galactosidase Activity in Mouse Tissues Expressing the <i>LacZ</i> Reporter Gene
Notice bibliographique
Résumé
The Escherichia coli LacZ gene (encoding β-galactosidase) is a widely used reporter for gene regulation analysis in transgenic mice. Determination of β-galactosidase activity is classically performed using 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-d-galactopyranoside/ferri-/ferrocyanide (X-Gal/FeCN) histochemistry. Uncertainty about the origin of the β-galactosidase signal is encountered in tissues containing high levels of endogenous β-galactosidase. Here, we show that reliable results can nevertheless be obtained in these tissues by performing the histochemical reaction under slightly basic pH conditions (pH 8-9). We further demonstrate that in this context, analysis of tissue sections may be advantageous over that of conventional whole-mount tissues because poor dye penetration and remaining tissue acidity are avoided in tissue sections. We also recommend that bacterial debris should always be carefully removed from the luminal surface of gastrointestinal tract specimens unless staining of resident microflora is deliberately used as an internal positive control in the assay. Finally, we show that 6-chloro-3-indolyl-β-d-galactopyranoside with nitrotetrazolium blue chloride works well as an alternative chromogenic substrate for visualizing LacZ reporter gene expression in cryostat sections. Its use in high endogenous β-galactosidase-expressing organs is superior over the use of X-Gal/FeCN at slightly basic pH conditions.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,009 | 0,018 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,002 | 0,002 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,002 | 0,005 |
| Bibliométrie | 0,002 | 0,002 |
| Études des sciences et des technologies | 0,002 | 0,002 |
| Communication savante | 0,001 | 0,002 |
| Science ouverte | 0,005 | 0,002 |
| Intégrité de la recherche | 0,005 | 0,007 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,099 | 0,106 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».