Analysis of PITX2 mutations reveals thresholds of PITX2 activity associated with anterior segment dysgenesis
Notice bibliographique
Résumé
Purpose: Investigate four mutant PITX2 proteins and determine their ability to bind DNA and activate gene expression. Refine the threshold of activity necessary for PITX2 to function normally. Methods: Four PITX2 missense mutations underlying Axenfeld-Rieger malformations, two within and two outside the homeodomain, were studied. Underlined residues indicate positions from the ATG start codon in exon 1. The first mutant protein R5W (R43W) was found in a family with three generations affected by severe Axenfeld-Rieger Syndrome (Idrees et al. Invest Ophthalmol Vis Sci 2002;43: E-Abstract 3402). The other 3 mutations studied have been reported in the literature and their positions are R90C (R52C in the homeodomain) L105V and N108T. Site-directed mutagenesis was used to introduce these changes to the PITX2 cDNA. Epitope-tagged PITX2 mutant constructs were expressed in COS-7 cells, yielding the appropriate 35kDa product by Western analysis. The effect of each missense mutation on PITX2-DNA binding was tested by electrophoretic mobility shift assays (EMSAs) and the transactivational ability of the mutant protein was tested using a luciferase reporter assay. Immunofluorescence was used to investigate subcellular localization of recombinant Xpress-tagged PITX2. Computer models were employed to study the possible interaction of the mutant proteins with DNA. Results: R5W has consistently failed to produce a stable protein. None of the 4 mutants inhibit the ability of PITX2 to translocate to the nucleus. L105V transactivates slightly higher than wild-type and binds to DNA. R52C and N108T transactivate at near wild type PITX2 levels and bind to DNA. Conclusions: This is the first time an unstable PITX2 mutant protein has been reported. In addition this is the first study investigating the function of missense PITX2 mutations outside the homeobox. The experiments show that missense mutations in PITX2 are able to disrupt the interaction of PITX2 with DNA and the transactivation potential of PITX2. This study provides the second report of a disease causing allele due to a hyperactive PITX2 mutant. The in vivo control of PITX2 activity may be very tightly regulated with both an under or hyperactivity of a mutant protein resulting in disease
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».