N-Glycopeptide Reduction with Exoglycosidases Enables Accurate Characterization of Site-Specific N-Glycosylation
Notice bibliographique
Résumé
We report a new approach called NGlycoReduction that generates an oligomannosylated N-glycopeptidome by enzymatically removing sugars outside the N-glycopeptide pentasaccharide core with exoglycosidases. This approach is based on our discovery that the fragmentation of glycopeptides is glycan-structure dependent and glycans with core mannose structures overwhelmingly lead to the generation of Y1 ions when subjected to MS/MS in mass spectrometry. Oligomannosylated glycopeptidome produced by NGlycoReduction can be mixed with the intact N-glycopeptidome and analyzed by HPLC-ESI-MS together to enable the identification of peptide sequence, glycosylation site and the structure of intact glycopeptides. The glycan structure of intact glycopeptides can be identified from MS/MS spectra of their own and their peptide sequences were identified by the MS 3 spectra of the oligomannosylated glycopeptides with the same Y1 ion. Both mass tolerance and difference in retention time were further used to increase the confidence in the Y1 ion alignment. This approach has the advantage of low cost and ease of processing and can be expanded to other samples, especially for characterizing site-specific N-glycosylation involving complex N-glycans. In this study, simultaneous analysis of the combined oligomannosylated N-glycopeptidome and the native glycopeptidome leads to the identification of 609 N-glycopeptides from the secretome and lysates of Huh7 cells.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».