Étude du rôle biologique de l'activateur de phosphatase Rrd 1 chez la levure Saccharomyces cerevisiae

Le stress oxidatif généré par l'environnement autant que par la cellule ellemême est délétère pour certains constituants cellulaires essentiels tels l'ADN, l'ARN, les protéines et les lipides et a par conséquent un impact considérable sur la survie cellulaire.Notre laboratoire s'est intéressé à Rrdl, un activateur de phosphatase qui joue un rôle essentiel dans la protection de la cellule contre ce type de stress.En effet, une cellule mutante pour le gène RRDJ est hypersensible à des agents causant du stress oxidatif, comme les UVA et le 4-nitroquinoline-l-oxide.Ces mutants présentent un autre phénotype intéressant, soit une résistance considérable à la rapamycine, un immunosuppresseur qui mime des conditions de carence nutritionnelle.Les travaux présentés dans cette thèse montrent que Rrdl interagit avec une phosphatase, Sit4, pour protéger la cellule contre les dommages à l'ADN induits par le stress oxidatif.Cette interaction pourrait permettre l'expression de gènes critiques pour la réparation de ce type de dommages.Nos travaux démontrent également qu'une souche mutante pour RRDJ présente un défaut dans la régulation de la transcription in vivo en réponse à un traitement à la rapamycine, et des extraits nucléaires dérivés de cette souche sont déficients pour l'activation de la transcription in vitro d'un gène rapporteur.De plus, nous montrons que la rapamycine provoque la dégradation de Rpb 1, la grosse sous unité de l'ARN polymérase II.Ce phénomène est réduit de façon dramatique dans Iv les cellules rrd]z\, suggérant que la transcription se poursuit chez les mutants, permettant la croissance malgré le traitement à la raparnycine.Nos travaux suggèrent aussi un autre rôle prédominant dans la cellule pour Rrdl.En effet, Rrd lest associé avec la machinerie transcriptioirnelle, de même qu'avec l'ARN polyrnérase II.Nous démontrons que les mutants rrd]A sont incapables de dégrader l'ARN polymérase II en réponse au 4-nitroquinoline-l-oxide en plus de la rapamycine.Les mutants montrent une accumulation de la forme ubiquitinée de Rpbl, et cette accumulation est causée par l'incapacité des mutants à déloger l'ARN polymérase II de la chrornatine en réponse à un arrêt de la transcription induit par ces deux agents.De plus, nous montrons qu'en réponse à ces agents, il n'y a pas de changement dans la conformation du domaine C-terminal de l'ARN polymérase II dans les mutants contrairement à ce qu'on observe dans la souche sauvage.L'ensemble de nos résultats suggèrent que Rrdl est requis pour isomériser le domaine C-terminal de l'ARN polymérase afin de permettre sa dégradation via le protéasorne lorsque l'élongation de la transcription est arrêtée.En plus de caractériser un rôle tout à fait novateur pour Rrdl, nos observations présentent la première démonstration que le domaine C-terminal de l'ARN polyrnérase est isomérisé in vivo, en plus d'associer une fonction à ce changement de structure.

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