Deterministic Trigger of Self-Renewal in Expanded HSCs Expressing Hoxb4 + Antisense Pbx1.
Notice bibliographique
Résumé
Abstract We previously reported the generation of pluripotent and ultracompetitive HSCs through modulation of Hoxb4 and Pbx1 levels. These Hoxb4hiPbx1lo HSCs display a tremendous regenerative potential, yet they are still fully responsive to in vivo regulatory signals that control stem cell pool size (20 000 HSCmouse) and differentiation pathways. Further work in our laboratory attempted to circumvent these physiological constraints by expanding Hoxb4hiPbx1lo transduced HSCs in vitro, and hence revealing their intrinsic expansion potential. Independent experiments were performed where primary mouse BM cells were co-infected with retroviruses encoding antisense Pbx1 cDNA plus YFP, and Hoxb4 plus GFP (double gene transfer ranged between 20–50%). Hoxb4hiPbx1lo HSCs measured using the CRU assay expanded by 105-fold during a 12 day in vitro culture. Following serial transplantations, these cells displayed an additional 4–5 log expansion in vivo. Total stem cell content per animal remained within normal limits. Southern blot analyses of proviral integrations showed that the expansion was polyclonal, and analyses of individually expanded clones provided a molecular proof of in vitro self-renewal (SR). This unprecedented level of HSC expansion in such a short time course (105-fold in 12 days) implies an absolute HSC doubling time of approximately 17 hours in our culture, raising the possibility that virtually all dividing HSCs undergo self-renewal. This analysis prompted us to dissect the impact of Hoxb4 on cell proliferation versus cell fate (SR?). When analyzed during the period of maximal HSC expansion, the cell cycle distribution of Sca+ or Sca+Lin− cells were comparable between the cultures initiated with neo control versus Hoxb4 BM cells (CTL vs Hoxb4: G0/G1: 66% vs 83%; S: 15% vs 9%; G2/M: 18% vs 7%). Correspondingly, CFSE tracking studies confirmed the identical, or even lower, number of cellular divisions in Sca+ cells isolated from cultures initiated with Hoxb4 versus neo transduced cells. Annexin V studies precluded protection from apoptosis as the major mechanism to increase HSC numbers since similar results (3–10% positive cells) were observed in the Hoxb4 versus neo-transduced cells. In summary, our studies support the emerging concept that distinct molecular pathways regulate cell proliferation and self-renewal, suggesting that Hoxb4 + antisense Pbx1 predominantly triggers self-renewal over HSC proliferation.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».