Ex Vivo Expansion of Human SCID-Repopulating Cells Using Recombinant TAT-HOXB4 Protein.
Notice bibliographique
Résumé
Abstract One of the major obstacles to the successful clinical application of hematopoietic stem cell (HSC) transplantation, particularly in the context of related haplotype-mismatched transplantation, unrelated cord blood transplants for adults, and grafts that are processed ex vivo to remove malignant, or alloreactive T cells, is the number of available long-term repopulating HSCs. The addition of soluble recombinant TAT-HOXB4 protein was recently reported to enable rapid in vitro expansion of murine HSCs that retain their in vivo proliferation and differentiation capacity. However, the ability of this recombinant protein to effectively expand human hematopoietic stem cells remains hypothetical. In addition, limited information is available on underlying mechanisms of HOXB4 HSC expansion. First, to determine the capacity of recombinant TAT-HOXB4 protein to promote human HSC expansion, we treated human CD34+ cells for 4 and 8 days with 40 nM, or 80 nM TAT-HOXB4 protein in X-Vivo 15 medium supplemented with Stem Cell Factor, TPO, IL-6 and Flt3-ligand. Cultures exposed to TAT-HOXB4 treatment for 8 days had no pronounced effect on the total cell yield. During this period, a 2-fold net loss of CFU-GEMM was observed for controls, in comparison to ~8-fold and ~5-fold expansions in response to 40 nM and 80 nM TAT-HOXB4 (p<0.05), respectively. Recombinant TAT-HOXB4 also induced ~10–15-fold expansion of large CFU-GM, compared to only ~2.5-fold increase for controls (p<0.05). HSC numbers were enumerated at the beginning and at the end of the treatment using the principle of limiting dilution in a 4-month NOD/SCID repopulation assay. Culture for 8 days in cytokines devoid of TAT-HOXB4 resulted in ~2-fold loss of SCID Repopulating Cells (SRCs), while cultures supplemented with 40 and 80 nM TAT-HOXB4 protein showed a 2.5-fold (95% CI 1.7 – 3.3 fold) and 5.5-fold (95% CI 3.6 – 7.4 fold) increase, respectively. Then, to determine whether the increase in HSC numbers resulted from HOXB4-enhanced proliferation of HSCs, we examined the cell cycle profile of control and HOXB4-treated cell populations using Hoechst 33342 and pyronin Y dyes. After 4-day treatment with 80 nM TAT-HOXB4, 44%±12% of CD34+CD38+ cells were in Go, compared to only 19%±6% of the controls (p<0.05). In contrast, similar proportions (89–91%) of quiescent CD34+CD38− cells were observed for both conditions. Tracking cell divisions using CFSE also showed that during this period, HOXB4-treated CD34+CD38+ cells underwent ~2 population doublings less than controls (p<0.05). In conclusion, short-term exposure of human CD34+ populations to recombinant TAT-HOXB4 protein has the potential to achieve clinically relevant HSC expansion levels. At the HSC level, these observations suggest that TAT-HOXB4 preferentially affects cell fate (self-renewal?) rather than cell proliferation.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».