Secretable Human Megakaryocyte Factor V Endocytosed from Plasma in Complex with Multimerin: The Origin of Human Megakaryocyte Factor V.
Notice bibliographique
Résumé
Abstract Factor V (FV) is an essential coagulation cofactor that circulates in distinct plasma and platelet pools. Unlike plasma FV, platelet FV is stored complexed to the megakaryocyte (MK) synthesized α-granule protein multimerin, which is not found in plasma. The origin of platelet FV has been controversial and recent studies have suggested human platelet factor V originates from plasma. To determine if human MK could endocytose FV and generate the FV-multimerin complexes, we investigated FV endocytosis and storage by human MK derived from cord blood CD34+ cells. Cells were cultured with or without 10% plasma in 15% BIT/ IMDM containing 5ng/ml SCF and 50ng/ml TPO. Human plasma or purified plasma FV was added on day 7 of culture. Cells were harvested to analyze α-granule proteins on day 11. Enzyme-linked immunoassays were used to evaluate MK content of FV and multimerin, and their complexes. Control α-granule proteins analyzed included albumin, IgG and fibrinogen, as they are known to originate from plasma. Multimerin was detected in all MK whereas FV, albumin, IgG, fibrinogen and FV-multimerin complexes were only detected in MK cultured with plasma. The amounts of plasma-derived proteins in MK were orders of magnitude lower than in platelets. MK cultured with purified FV had dose-dependent FV uptake. With SFLLRN stimulation, MK cultured with plasma released multimerin, FV, albumin, IgG and fibrinogen, consistent with their storage in secretion granules. Like platelet FV, MK FV showed a proteolyzed pattern. Double immunostaining showed partial colocalization of intracellular multimerin and FV in MK cultured with FV. Immunoelectron microscopy confirmed that like bone marrow MK, MK cultured with FV contained FV within demarcation membranes, small vesicles and α-granules. Analyses of FV expression by cultured MK, using semi-quantitative RT-PCR, indicated there were no significant differences in FV expression by MK cultured with or without plasma, at any of the time points evaluated. However, there was a trend to increased FV expression with MK maturation, and for MK cultured in plasma, FV expression was significantly higher at 15 compared to 7 days, raising the possibility that some FV was synthesized at late stages of megakaryopoiesis. Our study illustrates that cultured human MK can proteolyze and target endocytosed plasma FV into α-granules and that they can generate complexes of FV with multimerin.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».