Generation of Megakaryocytes from Human Embryonic Stem Cells.
Notice bibliographique
Résumé
Abstract The ability to generate multiple cell types from human embryonic stem cells (hESC) in culture offers an unprecedented opportunity to produce an unlimited supply of cells for research and clinical purposes. Megakaryocytes comprise only 0.02–0.05% of the nucleated cell population in the bone marrow, thus making them a difficult cell to isolate and study. The ES cell technology provides a resource for generating megakaryocyte progenitors for in vitro and in vivo analyses. For this approach to be successful, reproducible differentiation schemes that generate sufficient numbers of cells are necessary. With an embryoid body (EB)-based protocol, in serum-free media we are able to generate hematopoietic populations with megakaryocyte potential from two different hESC lines; H1 and HES2. Using CD41 as an early marker of definitive hematopoiesis, we found that 4 to 12% of the day 11–12 EB population expressed high levels of the marker (CD41Hi) whereas 10 to 20% expressed low levels of the marker (CD41Lo). Cells from the CD41Hi but not the CD41Lo population expressed the megakaryocyte marker GPIb. To further analyze these populations, both were isolated from day 12 EBs by cell sorting and cultured in media containing TPO and SCF. Following several days in culture, the CD41Hi population expressed increasing levels of GPIb, as determined by flow cytometry and real time PCR. PF4 was detected in the sorted CD41Hi population and levels increased 10-fold following culture. These cells also adhered to fibrinogen and collagen and stained positive for von Willebrand factor (vWF) and P-selectin. Following activation by PAR1, the cells bound soluble fibrinogen and expressed P-selectin on their surface. Few to no progenitors were detected in the CD41Hi fraction by colony assays suggesting that this population contained cells that were already committed to the megakaryocyte lineage. Incubation of the CD41Lo population of cells in the presence of TPO resulted in 70–80% of the cells expressing increased levels of CD41 and GPIb. Immunostaining revealed vWF and P-selectin expression following adhesion of the cells to fibrinogen and collagen. Both fibrinogen binding and P-selectin surface expression were detected following activation with PAR1. Quantitative PCR analysis demonstrated low levels of PF4 message in the sorted population with an increase of 3-fold following incubation in the presence of TPO. Progenitor cells were detected in colony assays suggesting that this population of cells contained megakaryocyte-like progenitors. Taken together, these finding demonstrate the efficient and reproducible generation of megakaryocytes from hESC using a serum-free EB protocol.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,003 | 0,002 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».