Chemoselective Coupling Preserves the Substrate Integrity of Surface-Immobilized Oligonucleotides for Emulsion PCR-Based Gene Library Construction
Pourquoi ce travail est dans la base
Une base qui oublie comment elle a trouvé un travail ne peut pas être vérifiée. Voici les voies qui ont admis celui-ci.
Notice bibliographique
Résumé
Combinatorial bead libraries figure prominently in next-generation sequencing and are also important tools for in vitro evolution. The most common methodology for generating such bead libraries, emulsion PCR (emPCR), enzymatically extends bead-immobilized oligonucleotide PCR primers in emulsion droplets containing a single progenitor library member. Primers are almost always immobilized on beads via noncovalent biotin–streptavidin binding. Here, we describe covalent bead functionalization with primers (∼10 6 primers/2.8-μm-diameter bead) via either azide–alkyne click chemistry or Michael addition. The primers are viable polymerase substrates (4–7% bead-immobilized enzymatic extension product yield from one thermal cycle). Carbodiimide-activated carboxylic acid beads only react with oligonucleotides under conditions that promote nonspecific interactions (low salt, low pH, no detergent), comparably immobilizing primers on beads, but yielding no detectable enzymatic extension product. Click-functionalized beads perform satisfactorily in emPCR of a site-saturation mutagenesis library, generating monoclonal templated beads (10 4 –10 5 copies/bead, 1.4-kb amplicons). This simpler, chemical approach to primer immobilization may spur more economical library preparation for high-throughput sequencing and enable more complex surface elaboration for in vitro evolution.
Récupéré en direct depuis OpenAlex et désinversé. Les résumés ne sont pas conservés dans cette base de données : les index inversés représentent 8,6 Go des 9,3 Go de texte de la base, et le serveur dispose de 13 Go libres.
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,001 |
| Communication savante | 0,000 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découle