341. Nucleic Acid Delivery Using Vesicular Stomatitis Virus-Based Vesicles
Notice bibliographique
Résumé
Gene delivery methods are essential to understand fundamental cellular mechanisms and to develop new therapies. Recombinant viruses are efficient to transfer nucleic acids but their safety is a concern. In addition, some commercial transfection reagents (including lipids and cationic polymers) and electroporation methods are cytotoxic. Interestingly, the sole expression of G envelope protein of the vesicular stomatitis virus (VSV) in mammalian cells can lead to the formation of VSV-G pseudotyped vesicles (V-VSV-G). In presence of polybrene, these vesicles are able to transfer plasmids in a large panel of animal cells. Unfortunately, the production of V-VSV-G and their use for nucleic acid delivery is poorly documented. Here we propose to improve this promising method of transfection. At first we developed a V-VSV-G production process by transient transfection of HEK-293 cells using polyethylenimine (PEI). Three modes of production were compared: cells cultivated in adherence, in suspension and on micro-carriers. Also we demonstrated that the quantity of vesicles produced depends on the VSV-G sequence used. The harvest of V-VSV-G from cell culture media was also optimized. Then, several parameters potentially involved in the formation and the transfer efficiency of V-VSV-G/DNA complex were studied: polybrene concentration, order of addition of mix transfection components, incubation time of the complexes, medium of transfection, etc. Stability studies also demonstrated that V-VSV-G are robust particles: DNA transfer capacity of V-VSV-G is efficient after 10 freezing and thawing cycles and V-VSV-G can be stored for long term at +4 °C, -20 °C and -80 °C. Finally, V-VSV-G/DNA ratio was optimized for three different cell types. Transfection efficiency of 70 % and 55 % were obtained for HEK-293 and HeLa cells respectively, with 1 µg of V-VSV-G and 0.4 µg of DNA. Transfection of refractory cells such as human myoblasts, reached 25 % with 5 µg of V-VSV-G and 0.8 µg of DNA. V-VSV-G can also deliver large plasmids (18 kb). Furthermore, no cytotoxicity was observed in cells transfected with these complexes. Presently, the potential of V-VSV-G to transfer siRNA is investigated. In conclusion, V-VSV-G is a powerful tool for nucleic acid delivery which could be useful for several applications oriented toward cell and gene therapies.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».